EZTrans細胞轉染試劑作為新一代的轉染試劑,其轉染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細胞。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理,具有轉染效率高,細胞毒性低,操作簡(jiǎn)單,重復性好,適用范圍廣等特點(diǎn)。...
細胞轉染技術(shù)主要分為三大類(lèi):化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒(méi)有一種方法是放之四海而皆準的,即沒(méi)有任何方法適用于所有細胞和所有實(shí)驗。因而只有依據自己的實(shí)驗要求選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實(shí)驗結果。下面介紹幾種常見(jiàn)的細胞轉染方法:1、DEAE-右旋糖苷法常言道:同性相斥,異性相吸。因而,當帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負電的磷酸骨架相遇,妥妥的火花四射,而后會(huì )被細胞膜抱團相擁并通過(guò)細胞內吞作用迎客到家。該法可用于瞬時(shí)轉染,操作相對簡(jiǎn)單、結果可重復,但是對細胞有一定的毒副作...
細胞轉染指的是將外源分子如DNA、RNA等導入到真核細胞內部的技術(shù)。隨著(zhù)基因和蛋白功能研究的深入,轉染已經(jīng)成為科研實(shí)驗中常用的技術(shù)手段之一。對于細胞轉染實(shí)驗,轉染試劑、轉染方法、細胞狀態(tài)等都會(huì )影響到細胞轉染的效率,本文主要對影響細胞轉染效率的8個(gè)因素做一介紹。1.轉染試劑瞬時(shí)轉染和穩定轉染可以選擇不同的轉染試劑,轉染試劑的選擇又可以根據已經(jīng)發(fā)表的文獻,已經(jīng)有很多細胞株被成功轉染,通過(guò)文獻資料可以參考最適的轉染試劑,當然也要根據不同的實(shí)驗需求選擇。一般來(lái)說(shuō)轉染試劑的要求是低毒,...
1、如何儲存和解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。長(cháng)時(shí)間儲存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍?zhuān)换瘜W(xué)介導方法:如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導的技術(shù);生物介導方法:有較為原始的原生質(zhì)體轉染,和現在比較多見(jiàn)的各種病毒介導的轉染技術(shù)。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù),是目前轉染效率較高的方法,同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性,在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化...
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時(shí)脫離生長(cháng)狀態(tài)而將其細胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再復蘇細胞用于實(shí)驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來(lái)購買(mǎi)、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時(shí)向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透...
原代細胞(primaryculturecell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以?xún)鹊募毎y稱(chēng)為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫學(xué)基礎研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應用于當今熱門(mén)的生物醫藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著(zhù)基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實(shí)驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉...
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