Alexa Fluor 488 標記鬼筆環(huán)肽（綠色）

產(chǎn)品描述
　　鬼筆環(huán)肽是從一種菌類(lèi)Amanita Dhalloides所提取出來(lái)的環(huán)肽。它與F-actin競爭性的結合。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養細胞和無(wú)細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。
　　本品為Alexa Fluor 488 標記鬼筆環(huán)肽（綠色），可發(fā)出高亮度、穩定的綠色熒光，染色反應特異性強，對比性高，適合用作F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較，Alexa Fluor 488鬼筆環(huán)肽具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)與actin亞單位一比一結合，并且不與G-actin結合，具有比Actin抗體更好的染色效果。(2)且本品的結合沒(méi)有物種差異性，適用性廣泛。(3)鬼筆環(huán)肽標記的非特異性信號可忽略，因而圖像的反差較好。(4)染色與用于細胞分析的其他熒光染色*兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物（包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗)。(5)經(jīng)本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。
技術(shù)資料
1. Ex(nm)：493
2. Em(nm)：517
3. 分子量：1900
4. 溶劑：DMSO
5. 結構式：

訂購信息

保存方法
　　冰袋運輸，收到貨后可按需分裝，并于-20℃避光干燥保存，避免反復凍融。1年有效。
使用方法
1. 準備1× Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液
吸取1 μL 1000×Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽存儲液到1 mL 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。
【注】：不同的細胞染色后情況不同，相應Alexa Fluor488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據不同情況而定。
2. 細胞染色步驟
（1）細胞培養過(guò)夜或更長(cháng)，使其密度達到50~60%匯合度。
（2）吸掉培養液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。
（3）使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進(jìn)行細胞固定，室溫固定10~30 min。
【注】：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過(guò)程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。
（4）室溫條件下，用PBS清洗固定好的細胞2~3次，每次10 min。
（5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3~5 min，從而增加其通透性。
【注】：鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過(guò)細胞，一般情況下不需對細胞進(jìn)行冷丙tong和TRITON X-100處理。
（6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10 min。
（7）每孔加入 Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液100 μL /孔（96孔板），室溫避光染色20~90 min，夏季時(shí)間相對短些。
（8）用PBS清洗細胞3次，每次5 min，去除掉多余的Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽。
（9）（可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進(jìn)行復染，如：100 μL /孔（96孔板），室溫3~5 min。用PBS清洗細胞2次，每次5 min。
（10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀(guān)察，選擇Alexa FluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。