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蛋白酶K跟蛋白酶的區別在哪里?

更新時(shí)間:2019-04-22      點(diǎn)擊次數:2322
  蛋白酶K主要應用于基因檢測中基因抽取,是檢測試劑盒生產(chǎn)的重要原料,蛋白酶K產(chǎn)品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而被廣泛應用于制備脈沖電泳的染色體DNA,以及去除DNA和RNA中的核酸酶?,F有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。
  蛋白酶K跟蛋白酶有什么區別:
  蛋白酶K廣泛應用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。
  蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類(lèi)的統稱(chēng),而蛋白酶K則是特指一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解,比如在提取DNA時(shí)溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它們不屬于同一個(gè)產(chǎn)品。
  蛋白酶K配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinaseK):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
  蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。
  孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
  作用:蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會(huì ),提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(cháng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì )對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核?的消失,從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現的問(wèn)題,并能達到理想的染色效果。
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