揭開(kāi)高保真DNA聚合酶的神秘面紗
更新時(shí)間：2018-06-22 點(diǎn)擊次數：1392
高保真DNA聚合酶*的擴增能力，簡(jiǎn)單模板可擴增20 kb，復雜模板可輕松擴增10 kb。*的靈敏度，模板親和力強，極微量的模板也可擴增。風(fēng)一樣的擴增速度：延伸時(shí)間極短，擴增速度可達15 sec/kb。廣泛的模板適應性：適用于基因組DNA和cDNA等復雜模板的擴增。通過(guò)定向改造，擁有高保真的特性，可以擴增長(cháng)達15Kb的DNA片段，適用于超長(cháng)序列的擴增，同時(shí)具有高靈敏度、高產(chǎn)量的優(yōu)勢。通過(guò)“直接進(jìn)化”技術(shù)，定向改造了種類(lèi)十分豐富的適用于多種不同實(shí)驗目的的生物酶，各有特點(diǎn)，可以滿(mǎn)足不同的客戶(hù)需求，且Kapa的系列產(chǎn)品可以適用于市場(chǎng)上現有的各類(lèi)PCR/Real-time PCR儀器。
高保真DNA聚合酶的不同點(diǎn),作用底物不同,高保真DNA聚合酶底物是NTP高保真DNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。高保真DNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒(méi)有，當需要解開(kāi)雙鏈的時(shí)候要解旋酶和拓撲異構酶的幫助。具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不僅有5‘到3’端的聚合酶活性，還具有3‘到5’端的外切酶活性。保證DNA復制時(shí)候校對，所以復制的忠實(shí)性高于轉錄的?？赡苁姑傅臉嬒蟀l(fā)生變化，促進(jìn)3'-OH與5'-PO4結合生成磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進(jìn)入結合位點(diǎn)，則不能與模板配對，無(wú)法改變酶的構象而被3'-5'外切酶活性位點(diǎn)所識別并切除之。
高保真DNA聚合酶在PCR中扮演中至關(guān)重要的作用，從某種意義來(lái)講PCR技術(shù)就是耐熱聚合酶的技術(shù)。生物醫藥領(lǐng)域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶，如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因為酶分子自身的結構和功能都有限制，隨著(zhù)研究人員實(shí)驗要求的提升和生物樣本復雜性的提高，野生型DNA聚合酶的局限性也逐漸凸顯出來(lái)，如擴增效率低，特異性差，高AT或GC含量樣本擴增結果差，樣本中或PCR 系統中有些抑制劑對反應有干擾等等。
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