操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(shí) (在37℃，5% CO2的條件下)。

2. 向培養板加入10 μl不同濃度的待測物質(zhì)。如果測定細胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。

3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時(shí)間 (例如: 6,  12, 24或48小時(shí))。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì )影響O.D值的讀數)。

5. 將培養板在培養箱內孵育1-4小時(shí)。

6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

注意事項:

1）CCK-8試劑盒的檢測依賴(lài)于脫氫酶催化反應，如果待檢測體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會(huì )造成背景O.D值升高，干擾檢測結果。如果實(shí)驗中有還原劑，請檢查背景的O.D值，即測定、比較空白培養基加入藥物與不加藥物的培養基（含細胞）在加入CCK- 8試劑后的O.D值，如果空白O.D值明顯偏高，則說(shuō)明有反應，應設法去除或折算干擾因素。

2）如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，培養基顏色發(fā)生變化，應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。細胞培養基酚紅不影響測定結果。

3）為使CCK-8試劑盒培養基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。